在化學(xué)分析、生物檢測(cè)、環(huán)境監(jiān)測(cè)等眾多科研與應(yīng)用領(lǐng)域,比色法分光光度計(jì)憑借其靈敏、便捷的特性,成為定量分析的得力工具。然而,要想獲取準(zhǔn)確可靠的測(cè)量結(jié)果,在使用過(guò)程中需謹(jǐn)遵一系列關(guān)鍵注意事項(xiàng),方能充分發(fā)揮其效能。
校準(zhǔn)環(huán)節(jié)不可忽視。開(kāi)機(jī)預(yù)熱后,用標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)儀器進(jìn)行波長(zhǎng)校正與吸光度校準(zhǔn),確保光源波長(zhǎng)精準(zhǔn)匹配待測(cè)物特征吸收峰,且吸光度讀數(shù)準(zhǔn)確無(wú)誤,避免因儀器初始狀態(tài)偏差導(dǎo)致數(shù)據(jù)失真。

比色皿選用與維護(hù)不容小覷。根據(jù)測(cè)量要求,優(yōu)先選擇光學(xué)均勻、厚度符合標(biāo)準(zhǔn)的石英或玻璃比色皿,使用前仔細(xì)檢查有無(wú)劃痕、污漬,及時(shí)清潔擦拭,保證透光性良好;盛放溶液時(shí),液面高度控制在規(guī)定范圍,一般距比色皿頂部約2-5毫米,防止溶液溢出或液量不足影響光徑,且拿取比色皿需持透光兩側(cè),指紋殘留都會(huì)干擾光線透過(guò),引入測(cè)量誤差。
樣品制備方面,要確保待測(cè)溶液均勻穩(wěn)定。充分混合溶解,對(duì)于易沉淀、分層樣品,需搖勻后迅速測(cè)量,或采取過(guò)濾、離心等預(yù)處理手段,讓比色法所依據(jù)的朗伯-比爾定律成立前提——溶液均勻性得以滿足,否則測(cè)得吸光度無(wú)法真實(shí)反映物質(zhì)濃度。
測(cè)量過(guò)程中,嚴(yán)格控制測(cè)定時(shí)間。部分顯色反應(yīng)隨時(shí)間推移會(huì)逐漸褪色或加深,應(yīng)在顯色穩(wěn)定期內(nèi)完成吸光度測(cè)量,通常從加入試劑計(jì)時(shí),在10-30分鐘內(nèi)操作為宜,超時(shí)可能錯(cuò)失最佳測(cè)量窗口,造成數(shù)據(jù)波動(dòng)。同時(shí),保持比色皿外壁干燥,避免水漬誤入光路,且連續(xù)測(cè)量多份樣品時(shí),適時(shí)用空白溶液校正儀器,消除測(cè)量累積誤差。
遵循這些注意事項(xiàng),比色法分光光度計(jì)才能在復(fù)雜實(shí)驗(yàn)環(huán)境中“穩(wěn)扎穩(wěn)打”,為科研人員精準(zhǔn)剖析物質(zhì)含量、探索微觀世界提供堅(jiān)實(shí)有力的數(shù)據(jù)支撐,助力實(shí)驗(yàn)研究邁向成功。